Секвенирование ДНК



жүктеу 8.77 Mb.
бет1/3
Дата30.03.2022
өлшемі8.77 Mb.
#18482
  1   2   3
988133
геномикаАйбол

ДНК секвенирлеу әдістері
Тексерген: Шоинбекова.С.А
Орындаған: Ерділхан Айбол, Куребаева Гулимай, Мухамбеталиева Арайлым
  • Биополимерлердің бірінші реттілігін анықтайтын әдісте секвенирлеу деген арнайы термин қолданылады.
  • Белгілі ДНК молекуласындағы нуклеотидтердің санын мен ретін жалғыз-жалғыздан ретті түрде ыдырауы арқылы анықтауға болады.

Сэнгер әдісі: «терминатор» әдісі.
  • 4 кезең:
    • Денатурация
    • Синтез
    • Терминация
    • Электрофорез

Сэнгер әдісі: «терминатор» әдісі.
Template area to be sequenced
-3′ OH
TCGACGGGC…
5′OP-
Primer
Template
Сэнгер әдісі
  • Белгіленген праймер мен бастапқы матрицаны қосу.
  • ddNTP-ді 4 пробирканың біріне қосуы.

Automated Version of the Dideoxy Method
Overview of Sanger sequencing method
ДНК + полимераза +
праймер +
dCTP dTTP dGTP dATP
ddATP ddGTP ddTTP ddCTP
полимеразная реакция с одним праймером
электрофорез
A•T G•C A•T T•A C•G T•A G•C G•C A•T G•C T•A T•A C•G T•A G•C A•T
Автоматизация секвенирования по Сэнгеру
До 96 независимых реакций, длина чтения до 900 н.
Время одного прогона ~ 40 минут
синтез
Метод Максама-Гилберта
В основе метода секвенирования ДНК путем химической деградации лежит ограниченное расщепление меченого фрагмента ДНК под действием специфических реагентов. Непременным условием проведения секвенирования этим методом является наличие фрагмента ДНК, меченного только по
одному концу. Определение нуклеотидной последовательности – методом ЭФ в ПААГ в последующей авторадиографией.
Стадии
Двухцепочечный фрагмент, подлежащий секвенированию, изолирован и радиоактивно помечен на 5’-концах 32P.
2. Затем фрагмент разрезают ферментом рестрикции и таким образом метку удаляют с одного конца.

жүктеу 8.77 Mb.

Поделитесь с Вашими друзьями:
  1   2   3




©emirb.org 2022
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет