Х а б а р л а р ы известия



жүктеу 5.08 Kb.

бет8/27
Дата22.04.2017
өлшемі5.08 Kb.
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   27

Материалы и методы 
 
Суспензии и растворы изучаемого экстракта готовили на фосфатно-солевом буфере, рН 7,2. 
Получение  препаратов  путём  водно-спиртовой  экстракции.  Растительный  материал  измель-
чали  до  получения  частиц  диметром 2-3 мм.  Для  удаления  липидов  измельчённый  растительный 
материал двукратно, в течение четырех часов обрабатывали 5 кратным объёмом этилового эфира 
уксусной  кислоты.  Экстракцию  растительного  материала  осуществляли 5 кратным  объемом 80% 
этилового спирта в течение четырёх часов, двукратно. Полученный экстракт отфильтровывали от 
растительного материала и высушивали при температуре не выше 56°С.  
В качестве объектов исследования были использованы вирусы гриппа (ортомиксовирусы) трех 
штаммов  с  различной  антигенной  формулой,  штаммы: A/FPV/Rostock/34 (H7N1), А/Алматы/8/98 
(H3N2) и А/Речная крачка/Коргалжын/847/04 (Н3N6). Вирус выращивали в аллантоисной полости 
10-11-дневных  куриных  эмбрионов  в  течение 24-36 ч.  при 37° С.  Титр  вируса  в  аллантоисной 
жидкости составлял 10
7
-10
9
 ЭИД
50
/мл. 
Растительные  экстракты:  водно-спиртовые  экстракты  получали  из  хвои  ели  обыкновенной 
(Pícea ábies) и из семян плода бадьяна анисового (Illicium anisatum). 
Инфекционный  титр  ортомиксовирусов  определяли  титрованием  на  куриных  эмбрионах 
методом  предельных  разведений.  О  наличии  вируса  судили  по  реакции  гемагглютинирующей 
активности. Титр инфекционности вирусов высчитывали по методу Рида и Менча [9]. 
Гемагглютинирующую  активность  вирусов  определяли  по  стандартной  методике  с  исполь-
зованием 1% взвеси куриных эритроцитов [10]. 
Вирусингибирующие  свойства  экстрактов  изучали  в  экспериментах  с  ортомиксовирусами  на 
куриных эмбрионах. Антивирусную активность определяли  методом «скрининг-тест», рассчитан-
ным  на  нейтрализацию  вируса  в  количестве 100 ЭИД
50
  заданными  концентрациями  экстракта. 
Критерием  противовирусного  действия  считали  отличие  инфекционного  титра  обработанного 
вируса  в  сравнении  с контролем. При  этом, как  правило, учитывалось только  полное  подавление 
инфекционной активности вируса. 
Вирулицидную  активность  исследуемых  экстрактов  определяли  путем  обработки  вируса 
испытуемыми  препаратами  при 37
0
С  в  течение 30 мин  с  последующим  титрованием  инфекцион-
ности  обработанного  вируса.  За  реальное  вирулицидное  действие  принимали  разность  между 
инфекционным титром вируса в пробе без обработки и его титром после обработки [11]. 
Нейраминидазную активность определяли стандартным тиобарбитуровым методом по Aminoff 
с использованием в качестве субстрата фетуина [12]. Об активности фермента судили по способ-
ности расщеплять субстрат с образованием окраски, дающей поглощение при длине волны 549нм. 
Обработку данных производили в программе Microsoft Office Excel 2003. Для математической 
обработки  результатов  использовали  стандартные  методы  нахождения  средних  значений  и  их 
средних ошибок [13]. 
 
Результаты исследования 
 
На  модели  вируса  гриппа  штаммы:  А/FPV/Rostock/34 (H7N1) и  А/Алматы/8/98 (H3N2) про-
водилось изучение действия водно-спиртовых экстрактов, полученных из хвои ели и семян бадьяна 
на инфекционный титр вируса гриппа.  
Антивирусная  активность  экстрактов  была  исследована  в  диапазоне  доз 0,05 – 25,0 мг/мл.  В 
качестве  положительного  контроля  использовали  коммерческий  антивирусный  препарат  «Тами-
флю» (осельтамивир) производства компании Сенекси САС (Франция), обладающий способностью 
активно подавлять размножение вируса гриппа типа А. 
Установлено,  что  в  дозе 0,25 мг/мл  растительные  экстракты  полностью  подавляли  репро-
дукцию вируса гриппа с антигенной структурой H7N1 и H3N2. В дозе 0,05 мг/мл экстракт, полу-
ченный из хвои ели был способен подавлять репродукцию вируса гриппа с антигенной структурой 
H7N1 на 56%, а со структурой H3N2 – на 31% (таблица). В этой же дозе экстракт, полученный из 
семян  бадьяна,  обладал  более  выраженной  антивирусной  активностью  в  отношении  изученных 
вирусов гриппа. Показано, что в дозе 0,25 мг/мл антивирусная активность растительных экстрактов 
заметно  превышала  антивирусную  активность  коммерческого  антивирусного  препарата  «Тами-
флю». 

ISSN 2224-
Доза 
вещества
мг/мл 
25,0 
2,5 
0,25 
0,05 
Такж
25,0 мг/мл
По ос
Показ
падению 
вируса гр
титра разн
антивирус
трактов. 
экстракто
Изуче
поверхнос
Иссле
подтипам
ность изуч
По  п
активност
 
-5308
 
            
Сравнител
а, 
Хвоя ел
100±0,0
100±0,0
100±0,0
56±0,0
же  было  про
л (рисунок 1
си абсцисс – пр
Рисуно
зано,  что  о
инфекцион
иппа экстра
ных штамм
сного  преп
Полученны
ов, полученн
ена  способн
стных антиг
едования  пр
и  нейрамин
чали в диап
полученным
ти фермента
                      
ьная вирусинг
А/FPV/Ros
ли 
Семен
00 100
00 100
00 100
05 61
оведено  изу
1). 
репараты, по о
А/FP
ок 1 – Вирулиц
при обраб
обработка  ви
ного  титра 
актом, полу
ов вируса н
парата  «Там
ые  данные 
ных из хвои 
ность  расти
генов ортом
роводили  н
нидаз: H7N1
пазоне доз от
м  данным 
а (IC
50
) (рису
                     
гибирующая ак
при воздейств
Вир
stock/34 (H7N1)
а бадьяна 
0±0,00 
0±0,00 
0±0,00 
±0,04 
учение  виру
оси ординат – с
PV/Rostock/34 
цидная активн
ботке вируса гр
ируса  грипп
вируса – н
ученным из 
на 4,75–4,25
мифлю»  уст
указывают
ели и семян
ительных  эк
миксовирусо
а  различны
1, H3N2 и  Н
т 0,4 до 25,0
была  расс
унок 2).  
                      
 
45 
ктивность раст
вии на вирусы 
 
русингибирую
) 
Тамифлю 
100±0,00 
100±0,00 
27±0,04 
8±0,05 
 
улицидной  а
 
 
снижение титр
(H7N1) и А/Ал
 
ность растител
риппа А препа
 
па  экстракт
на 2,25–1,7
семян бадья
 lg. При это
тупала  вир
т  на  ярко 
н бадьяна, в 
кстрактов  и
ов. 
ых  штаммах 
Н3N6.  Влия
0 мг/мл.  
считана  до
  Серия биол
тительных вод
гриппа типа А
ющая активнос
Хвоя ели 
100±0,00 
100±0,00 
100±0,00 
31±0,03 
активности 
ра инфекционн
лматы/8/98 (H
ьных водно-сп
аратами в дозе 
том,  получе
5 lg в  зави
яна, привод
ом вирулици
рулицидной 
выраженн
особенност
ингибироват
вируса  гри
ние  экстрак
за  экстракт
логическая и м
дно-спиртовых
А 
сть, % 
А/Алматы/8/
Семена ба
100±0
100±0
100±0
67±0,0
растительны
ности вируса гр
H3N2). 
пиртовых экстр
25,0 мг/мл 
енным  из  хв
исимости  от
дила к сниж
идная актив
активности
ную  вирули
ти из семян 
ть  нейрамин
иппа  челове
ктов  на  нейр
тов  способ
медицинская
х экстрактов  
/98 (H3N2) 
адьяна 
Т
,00 
1
,00 
1
,00 
4
05 
ых  экстракт
 
риппа в lg, шт
рактов,  
вои  ели  пр
т  штамма.  О
жению инфек
вность комм
и  раститель
ицидную  а
бадьяна. 
нидазную  а
ека  и  птиц  с
раминидазн
бная  подав
. № 3. 2015 
 
Тамифлю 
100±0,00 
100±0,00 
46±0,04 
0±0,00 
тов  в  дозе 
таммы: 
иводила  к 
Обработка 
кционного 
мерческого 
ьных  экс-
активность 
активность 
с  разными 
ную  актив-
лять 50% 

Известия Н
 
Рису
Показ
лять актив
Однако, р
во всем и
подавлял 
способнос
А  подтип
«Тамифлю
вирусного
Закл
ели  и  сем
актуальны
тивно под
активност
Работ
руемых Ми
 
[1]  Ne
ton. – USA, 
[2]  Wo
[3]  Дж
оpганизация
болезням. – 
[4]  To
the 2009 H1
P. 1316-132
[5]  We
Microbiol Re
[6]  Ho
[7]  Jia
[8]  Бо
растительно
[9]  Re
[10]  Зак
ностических
[11]  Ма
циклов // Х
венных сред
Национально
унок 2 – Сравн
зано,  что  ра
вность нейр
растительны
исследованно
нейрамини
сть растител
пов N2 и  N1
ю»,  блокиру
о фермента 
ючение. Та
мян  бадьяна 
ых штаммов
давлять акти
тью коммерч
та  выполнен
инистерство
elson K., Willia
2014. – 940 p. 
oodland D.L. C
жанабаев P.Т., 
ях  в  Южно-Ка
М., 2014. – С.
ooher R., Collin
1N1 influenza p
7. 
ebster R.G., Be
ev. – 1992. – V
offmann-La Roc
ang. S. und Sing
чков Д.В., Сы
ого сырья. – 20
ed L., Muench H
кстельская Л.Я
х и постинфек
акарова  Н.В., 
Химико-фармац
дств – ВНИХФ
ой академии н
 
нительное изуч
п
астительный
раминидазы 
ый экстракт н
ом диапазон
идазу  подти
льных экстр
1  была  сопо
ующего  раз
нейраминид
аким образо
проявляют
в вирусов гр
ивность нейр
ческого ант
на  благодаря 
ом образовани
ams C. Infection
Chronic viral inf
Аяпбеpгенова
азахстанской  о
 86-87. 
ns J., Street J., 
pandemic: a sy
ean W.J., Gorm
Vol. 56. – Р. 152
che: Factsheet T
gh. G. Chemica
солятин С.В., 
012. – № 3. – С
H. A simple me
Я., Шендерови
ционных сыво
Бореко  Е.И., 
цевтический ж
ФИ. – 2002. – №
наук Республи
чение чувствит
при обработке
й  экстракт, 
подтипа N2
не был спос
не доз (данн
ипа N2 и  м
рактов подав
оставима  с 
змножение 
дазы. 
ом, показано
т  выраженну
риппа. Уста
раминидазы
тивирусного
наличию  гр
ия и науки Ре
Л
n disease epide
fections // Viral
а Г.С., Мухтаp
области // Мат
Braunack-May
ystematic revie
man O.T., Cham
2-179. 
Tamiflu, Stand 
al synthesis of sh
Калашников А
С. 81-87. 
ethod of estimat
ич С.Ф. Метод 
ороток // Вопро
Моисеев  И.К.
журнал: Научн
№ 1. – С. 5-7. 
ики Казахста
   
46  
 
тельности нейр
е растительным
 
полученны
2 уже в дозе
собен подав
ные не прив
менее  актив
влять нейра
активность
вируса  гри
о, что водно
ую  противо
новлено, чт
ы вируса гри
о препарата «
антовых  про
еспублики Каз
ЛИТЕРАТУРА
 
emiology: theor
l immunology. 
pкызы Ф. и др
т-лы VI Ежего
yer, Marshall H
ew // Influenza
mbers T.M., Kaw
17. – Novembe
hikimic acid an
А.И. и др. Пои
ting fifty percen
удаления несп
осы вирусолог
  и  др.  Против
но-технический
ан  
раминидазы ра
ми экстрактами
ый  из  хвои  е
е 0,17 мг/мл
лять активн
ведены). Эк
вно  нейрами
аминидазную
ью  коммерч
иппа  именно
о-спиртовые
овирусную  а
то раститель
иппа А подт
«Тамифлю»
оектов 0112Р
захстан. 
А 
ry and practice
– 2014. – Vol. 
р. Состояние и
одного  Всерос
H. Community 
 and other resp
waoka Y. Evolu
er 2006. 
nd its analogues
ск сырья для в
nt endpints // Am
пецифических
гии. – 1979. – №
вовирусная  акт
й и производст
азличных штам
и 
ели  способе
л, подтипа N
ность нейрам
кстракт из се
инидазу  по
ю активност
еского  анти
о  за  счет  у
е экстракты
активность  п
ьные экстра
типов N2 и N
». 
РКО2471  и 
. “Jones and Ba
27, № 1. – P. 1
инфекционного
ссийского  Кон
knowledge, be
piratory viruse
ution and ecolo
s // Tetrahedron
выделения шик
mer. J. Hyg. – 19
х ингибиторов 
№ 5. – С. 560-5
тивность  адам
твенный журн
 
ммов вируса гр
ен  эффектив
N6 – в дозе 0
минидазы п
емян бадьян
одтипа N1. 
ть вируса гр
ивирусного 
угнетения  а
, полученны
против  эпид
акты способн
N6, что сопо
0113РК0047
artlett Learning
-15. 
о контpоля в м
нгресса  по  инф
ehaviors and at
s. – 2013. – V
ogy of influenz
n. – 1998. – № 5
кимовой кисло
938. – Vol. 27. –
гемагглютина
561. 
мантансодержа
нал. Центр хим
риппа  
вно  подав-
0,24 мг/мл. 
одтипа N1 
на активно 
При  этом 
риппа типа 
препарата 
активности 
ые из хвои 
демически 
ны эффек-
оставимо с 
3  финанси-
g”. – Burling-
медицинских 
фекционным 
ttitudes about 
Vol. 7, № 6. –   
a A viruses // 
54. – P. 4697. 
оты // Химия 
– P. 493-497. 
ации из диаг-
ащих  гетеро-
мии лекарст-
         

ISSN 2224-5308
 
                                                                               Серия биологическая и медицинская. № 3. 2015 
 
 
47 
[12]  Aminoff D. Method for the quantitative estimation of N-acetylneuraminic acid and their application to hydrolysates of 
sialomucoids // Biochem. J. – 1961. – Vol. 81. – P. 384-392. 
[13]  Урбах  В.Ю.  Статистический  анализ  в  биологических  и  медицинских  исследованиях. – М.:  Медицина, 1975. – 
296 с. 
 
REFERENCES 
 
[1]  Nelson K., Williams C. Infection disease epidemiology: theory and practice. “Jones and Bartlett Learning”, Burlington, 
USA, 2014, 940 p. (in Eng.). 
[2]  Woodland D.L. Chronic viral infections. Viral immunology, 2014, Vol. 27, №1, P. 1-15 (in Eng.). 
[3]  Janabayev P.T., Ayapbepgenova G.S., Muhtapkyzy F., et al. Status CHECK-infectious medical opganizatsii in South 
Kazakhstan region. Materials of VI Annual All-Russian Congress on Infectious Diseases. - M., 2014. - P. 86-87. (in Russ.). 
[4]  Tooher R., Collins J., Street J., Braunack-Mayer, Marshall H. Community knowledge, behaviors and attitudes about the 
2009 H1N1 influenza pandemic: a systematic review. Influenza and other respiratory viruses, 2013, Vol.7, №6, P. 1316-1327 (in 
Eng.). 
[5]  Webster R.G., Bean W.J., Gorman O.T., Chambers T.M., Kawaoka Y. Evolution and ecology of influenza A viruses. 
Microbiol. Rev., 1992, Vol. 56, Р. 152-179 (in Eng.). 
[6]  Hoffmann-La Roche: Factsheet Tamiflu, Stand 17, November 2006 (in Eng.). 
[7]  Jiang. S., Singh. G. Chemical synthesis of shikimic acid and its analogues. «Tetrahedron», 1998, №54, P. 4697 (in Eng.). 
[8]  Bochkov D.V., Sysolyatin S.V., Kalashnikov A.I. and others. Search for the allocation of raw material shikimic acid. 
Chemistry of plant raw materials. - 2012. - № 3. - p. 81-87 (in Russ.). 
[9]  Reed L., Muench H. A simple method of estimating fifty percent endpints. Amer.J.Hyg., 1938, Vol. 27, P. 493-497 (in 
Eng.). 
[10]  Zakstelskaya L.Ya., Shenderovich S.F. The method of removing non-specific inhibitors of hemagglutination diag-
nosticheskih and postinfectious sera. Problems of Virology. - 1979. - № 5. - p. 560-561. (in Russ.). 
[11]  Makarova N.V., Boreko E.I., Moiseev I.K., et al. Antiviral activity of adamantane hetero-cycles. Chemical and 
Pharmaceutical Journal: Scientific-technical and industrial journal. Center for Chemistry-governmental funds pharmaceuticals - 
VNIKhFI. - 2002. - № 1. - P. 5-7. (in Russ.). 
[12]  Aminoff D. Method for the quantitative estimation of N-acetylneuraminic acid and their application to hydrolysates of 
sialomucoids. Biochem. J., 1961, Vol. 81, P. 384-392 (in Eng.). 
[13]  Urbach V.Yu. Statistical analysis in biological and medical research. - M .: Medicine, 1975. - 296 p. (in Russ.). 
 
 
Pícea ábies ЖƏНЕ Illicium anisatum СУЛЫ-СПИРТТІ ЭКСТРАКТІЛЕРДІҢ  
АНТИВИРУСТЫҚ ҚАСИЕТІ 
 
А. С. Тұрмағамбетова, Н. С. Соколова, М. С. Алексюк,  
А. П. Богоявленский, В. Э. Березин  
 
ҚР БҒМ ҒК Микробиология жəне Вирусология институты РМК, Алматы, Қазақстан 
 
Тірек сөздер: тұмау вирусы, шырша қылқаны, бадьяна тұқымы, вирустарға қарсы белсенділік, нейра-
минидаза ингибитор. 
Аннотация.  Жыл  сайын  əлемде  ДСҰ  мəліметтері  бойынша  тұмау  эпидемиясымен 3-тен 5 млн.  адам 
ауырса, оның 500 мыңы қайтыс болады, бұл ірі əлеуметтік жəне медициналық мəселе. Қазақстанда барлық 
инфекциялық  аурулардың 90 % осы  тұмау  мен  респираторлық  инфекцияларға  тиесілі.  Тұмаудың  жеңіл 
түрлерін  емдеуде  дəстүрлі  емес  медицина  қолданылуда.  Өсімдік  препараттары  вирус  пен  клетканың  өзара 
қарым-қатынас жасайтын жолдарына əсер етеді деген түсінік бар. Мақалада шыршаның жəне қылқанынды 
тұқымның  сулы-спиртті  экстрактінің  вирусқа  қарсы  белсенділігі  зерттелінген,  шырша  қылқанынан  жəне 
бадьядан бөлініп алынған дəрі негізінде осельтамивир, вирустарға қарсы «Тамифлю» препаратының негізгі 
құрамы. Көрсетілген, өсімдік препараттарының экстрактілері, тұмау вирустарының А (H3N2 и H7N1) қарсы 
қолдануға  болатындығын  көрсетті.  Өсімдік  экстрактілері  А  вирусының  подтиптері N2 жəне N6 нейра-
минадазаларын  залалсыздандыратындығы  анықталды,  яғни  вирустарға  қарсы  препарат  «Тамифлюге» 
коммерциялық бəсекелес бола алады. 
 
Поступила 20.05.2015 г. 
 
 
 
 

Известия Национальной академии наук Республики Казахстан  
 
 
   
48  
N E W S 
OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE REPUBLIC OF KAZAKHSTAN 
SERIES OF BIOLOGICAL AND MEDICAL 
 
ISSN 2224-5308 
Volume 3, Number 309 (2015), 48 – 56 
 
 
MOLECULAR SCREENING OF WHEAT ENTRIES  
FOR RESISTANCE TO TAN SPOT  
PYRENOPHORA TRITICI-REPENTIS 
 
А. М.
 
Kokhmetova
1
, M. N.
 
Atishova
1
, Z. B.
 
Sapakhova
1
, R. A.
 
Urazaliev

 
1
Institute of Plant Biology and Biotechnology, Almaty, Kazakhstan
2
Kazakh Research Institute of Farming, Almalybak, Kazakhstan. 
E-mail: gen_kalma@mail.ru 
 
Key words: wheat, tan spot, resistance genes, molecular markers, selected. 
Abstract.  Tan spot is one of the most harmful diseases of common and durum wheat in many agricultural 
regions of the world. This disease is dangerous and rapidly progressing both worldwide and in Kazakhstan. Yield 
reduction due to the negative impact of the pathogen can reach 60%. The purpose of this study is to identify carriers 
of resistance to one of the most aggressive toxins of tan spot ToxA using molecular markers. The molecular and 
phytopathological screening of winter wheat germplasm from collection nurseries for resistance tan spot Pyreno-
phora tritici-repentis was carried out. Cultivars and wheat samples were differentiated in terms of resistance and 
susceptibility to tan spot. Molecular screening was conducted using SSR markers Xfcp394. As a result of study           
11 wheat entries resistant to tan spot was identified. Selected entries are carriers of the recessive allele tsn1 
conferring insensitivity to tan spot toxin ToxA. Scope: genetics and plant breeding. 
 
 
УДК: 632.42: 633:576.3/7.086.83:581.4  
 
МОЛЕКУЛЯРНЫЙ СКРИНИНГ ОБРАЗЦОВ ПШЕНИЦЫ  
НА УСТОЙЧИВОСТЬ ПИРЕНОФОРОЗУ  
PYRENOPHORA TRITICI-REPENTIS 
 
А. М.
 
Кохметова
1
, М. Н.
 
Атишова
1
, З. Б.
 
Сапахова
1
, Р. А. Уразалиев
2
 
 
1
Институт биологии и биотехнологии растений, Алматы, Казахстан6 
2
Казахский НИИ земледелия и растениеводства, Алмалыбақ, Казахстан 
 
Ключевые слова: пшеница, пиренофороз, гены устойчивости, молекулярные маркеры.  
Аннотация.  Пиренофороз  является  одной  из  самых  вредоносных  заболеваний  мягкой  и  твердой 
пшеницы  во  многих  сельскохозяйственных  регионах  мира.  Это  заболевание  является  опасным  и  быстро 
прогрессирующим как во всем мире, так и в Казахстане. Снижение урожайности из-за негативного влияния 
патогена  может  достигать 60%. Целью настоящего  исследования является  идентификации  носителй  устой-
чивости к одному из наиболее агрессивных токсинов пиренофороза ToxA с использованием молекулярных 
маркеров. Проведен молекулярный и фитопатологический скрининг гермоплазмы озимой мягкой пшеницы 
из коллекционных питомников на устойчивость пиренофорозу Pyrenophora tritici-repentis. Сорта и образцы 
дифференцированы по уровню устойчивости и восприимчивости к пиренофорозу. Молекулярный скрининг 
проведен с использованием SSR маркера Xfcp394. В результате исследований идентифицировано 11 образ-
цов  пшеницы,  устойчивых  к  пиренофорозу.  Отобранные  образцы  являются  носителями  рецессивного  tsn1 
аллеля  гена,  контролирующего  нечувствительность  к  токсину  гриба  пиренофороза ToxA. Область  приме-
нения: генетика и селекция растений. 
 

ISSN 2224-5308
 
                                                                               Серия биологическая и медицинская. № 3. 2015 
 
 
49 

1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   27


©emirb.org 2017
әкімшілігінің қараңыз

войти | регистрация
    Басты бет


загрузить материал