Issn 1563-0218 Индекс 75866



жүктеу 5.01 Kb.

бет2/21
Дата11.05.2017
өлшемі5.01 Kb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   21
часть микробных клеток погибает. Для изучения чувствительности свободных и иммобилизованных клеток к 
такому стрессовому воздействию использовался желудочный сок, который был пoлучен при гастроскопии. Его 
добавляли к культуре лактобактерий в среде МРС-1, содержащей 10

клеток/мл и инкубировали в течение часа, 
после чего определяли количество выживших клеток. При воздействии желудочного содержимого на жидкий 
концентрат лактобактерий их биотитр  (концентрация живых клеток) уменьшается на 4 порядка (рис. 1). Это 
означает,  что  при  пероральном  применении    суспензии  лактобактерий  следует  ожидать,  что  лишь 
незначительная часть их жизнеспособных клеток достигает толстого кишечника. По этой причине его следует 
рассматривать  скорее  как  ценный  продукт  питания,  богатый  ферментами,  витаминами,  но  не  как 
лекарственный препарат, предназначенный для активной колонизации кишечника лактобациллами.  
Использование  в  экспериментах  с  «модельным  желудком»  не  свободных,  а  иммобилизованных  клеток 
лактобацилл  выявило,  что  прикрепление  микробных  клеток  на  сорбент  ЗРШ  оказывает  защитное  действие  в 
отношении желудочного сока. Количество жизнеспособных клеток в этом случае снижается лишь на порядок. 
Скорее всего, это связано с тем, что клетки, входящие в состав образованных на сорбенте микроколоний, лучше 
защищены от  бактерицидных факторов и неблагоприятного действия окружающей среды, поскольку покрыты 
дополнительной  общей  мембраной [1]. Поэтому  иммобилизованные  пробиотики  по  устойчивости  к 
воздействию  желудочного  сока  значительно  превосходят  жидкий  концентрат  на  основе  свободных  клеток 
микроорганизмов и могут беспрепятственно преодолевать «желудочный» барьер при их пероральном введении. 
 
Кроме того, их метаболитическая активность выше, поскольку в составе микроколоний и биопленок она 
контролируется  на основе «Quorum sensing». Эта  система  носит  такое  название,  поскольку  она  координирует 
работу  генов,  экспрессия  которых  происходит  только  при  достижении  определенной  плотности  микробной 
популяции  (не  менее 10
7
  клеток/мл).  Гены,  кодирующие  ферменты,  обеспечивающие  синтез  лактобациллами 
таких антимикробных факторов как бактериоцины и микроцины, регулируются этой системой [1; 11]. 
 
 
 
Рисунок  1 - Влияние искусственной желудочной среды на жизнеспособность свободных и 
иммобилизованных клеток лактобацилл 
 
Активность  пробиотиков,  определяемую  в  условиях  in vitro,  принято  оценивать  по  титру  микробных 
клеток  в  препарате  или  уровне  их  физиологической  активности.  Поскольку  важнейшей  характеристикой 
эффективности 
пробиотического 
действия 
является 
антимикробная 
активность, 
представлялось 
целесообразным  изучение  влияния    иммобилизации  на  этот  показатель.  Антагонистическую  активность 
определяли после совместного культивирования комплекса иммобилизованных клеток лактобацилл (КИКЛ) в 
жидкой питательной среде MRС-5 в течение 24 часов в отношении трех тест-культур Salmonella typhimurium, 
Staphylococcus aureus и Candida albicans.  Ингибирующий  эффект  препарата  определяли  по  количеству 
выживших клеток тест-штаммов (% к их уровню при выращивании в питательной среде без пробиотиков). Для 
этого  в систему вносили 1 мл взвеси лактобацилл в концентрации 10
8
 КОЕ/мл, 1 г КИКЛ или 1 г сорбента без 
клеток. Их добавляли  к 10 мл  суспензии  тест-штаммов (10
8
  клеток/  мл)  в  среде MРС-5, то  есть  соотношение 
культур составляло 0,1:1,0 (табл.2).  
Видно,  что  комплекс  из  свободных  клеток  лактобацилл  оказывает выраженное  негативное  действие  на 
все 3 тест-культуры. В то же время и сам сорбент способен связывать до 28-33% клеток этих микроорганизмов. 
Поэтому  при  использовании  комплекса  иммобилизованных  клеток  лактобацилл  происходит  эффективное 


 
подавление  роста  тест-культур.  Согласно  стандартным  требованиям,  количество  живых  клеток  тест-штаммов 
бактерий  по  истечении 24 часового  совместного  культивирования  с  лактобактериями  не  должно  превышать 
уровень 2 % по  сравнению  с  контролем.  При  определении  антагонистической  активности  КИКЛ  после  его 
совместного  культивирования  с  микроорганизмами – мишенями  эта  цифра  многократно  превышена,  то  есть, 
иммобилизованные  клетки  пробиотиков  в  условиях  in vitro  практически  полностью  подавляют  рост  и 
жизнеспособность данных тест-организмов.  
 
Таблица 2 – Антагонистическая активность комбинированного препарата при совместном культивировании с 
тест-организмами  
 
Вариант 
Количество жизнеспособных клеток тест-штаммов, % к контролю 
Salmonella typhimurium 
50-90 
Staphylococcus aureus 
S60 
Candida albicans 
КАА88 
КИКЛ 0,8±0,01 
0,6±0,03 
8,3±0,2 
КСК 17,5±2,1 
16,5±1,3 
29,6±1,6 
ЗРШ 67±2,6 
70±4,6 
72±5,3 
Контроль  
100 
100 
100 
Примечание: КИКЛ - комплекс иммобилизованных клеток лактобацилл; КСК-комплекс свободных 
клеток; ЗРШ – зауглероженная рисовая шелуха. 
 
Таким  образом,  при  сравнительной  оценке    устойчивости    свободных  и  иммобилизованных  клеток 
лактобацилл  к  желудочному  соку  были  получены  результаты,  свидетельствующие  о  достаточно  высокой 
устойчивости  иммобилизованных  бактериальных  препаратов    к  бактерицидному  действию  биологических 
жидкостей,  вероятно,  это  связано  с  протективным  действием  карбонизированного  носителя.  Кроме  того, 
клетки,  образующие  микроколонии,  лучше  защищены  от  бактерицидных  факторов  и  неблагоприятного 
действия  окружающей  среды,  что  может  способствовать  преодолению  «желудочного»  барьера  при  их 
пероральном введении. Иммобилизация клеток лактобацилл повышает их антагонистическую активность 
 
Литература 
1  Бондаренко  В.М.,  Мацулевич  Т.В.  Дисбактериоз  кишечника  как  клинико-  лабораторный  синдром: 
современное состояние проблемы. - М., Гэотар-Медиа. - 2007. – С. 304-305. 
2 Решетников В.И. Разработка лекарственных форм препаратов с иммунобиологической и сорбционной 
активностью //Фармация. – 2002. - №5. – С. 40-44. 
3  Емуранов  М.М.,  Шилина  Ю.А.,  Рябикин  Ю.А.,  Зашквара  О.В.,  Шабанова  Т.А.,  Бийсенбаев  М.А., 
Мансурова  Р.М.,  Мансуров  З.А.  Физико-химическое  исследование  углеродных  материалов  на  основе 
нетрадиционного  растительного  сырья // Материалы 4 международного  симпозиума  «Физика  и  химия 
углеродных материалов. Наноинженерия». – Алматы, 2006. – С. 168-171. 
4  Курдиш  И.К.  Взаимодействие  микроорганизмов  с  твердыми  материалами  и  его  биотехнологическое 
значение // Микробиологический журнал. – 1999. - Т. 61, № 1. - С. 60-73. 
5 Жубанова А.А., Шигаева М.Х. Иммобилизованные клетки микроорганизмов // Биотехнология. Теория и 
практика. - 1997. - № 2. - С. 3-12.  
6  Тихонова  Л.  С.,  Белоцерковский  М.  Ц.  Повышение  эффективности  сорбции  микроорганизмов  на 
активированном угле при поляризации сорбента // Прикладная биохимия и микробиология - 1995. - Т. XXV, №2. 
- C. 184 - 187. 
7  Дигель  И.Э.,  Жубанова  А.А.  Прикрепительная  иммобилизация  клеток  микроорганизмов // 
Биотехнология. Теория и практика. - 1997. - №4. - С. 3-9.  
8  Волков  М.Ю.  Эффективные  формы  пробиотиков,  иммобилизованных  на  природных  адсорбентах // 
Пищевые ингридиенты. Сырье и добавки. – 2007. - № 1. – С.48-51. 
9 Dunne W.M.Jr. Bacterial adhesion; seen any good biofilms lately? // Clin. Microbiol. Rev. -2002. – Vol. 15. – 
P. 155-156. 
10 Bhinu V.S. Insight into biofilm-associated microbial life. – J. Mol. Microbiol. – 2005. - Vol. 3. – P. 197-214. 
11 Kuchma S.L., O’Toole G.A., Surface-induced and biofilm induced changes in gene expression // Curr. Opin 
Biotachnol. - 2000. – Vol. 11. – P. 429-433. 
 
Тұжырым 
     Жоғары  температурада  көміртектеленген  күріш  кебегін  этанолмен  өңдегенде  оның  сорбциялық 
қасиеті 8% жоғарылайды.  Иммобилизенген  лактобацилла  клеткалары  қарын  жəне  өт  сөліне  тұрақты 
антагонистік бейсенділігі жоғары.  
Summary 
Etanol   cultivation carbonized acid sorbent on the Rice Hush base prefer the sorbtion property in attidude 
Lactobacillus cells. Cells immobilization of  Lactobacillus is elevate their stability to gastrict juise, and stimulate 
antagonistic activity. 

10 
 
 
 
УДК:579-035.571 
Савицкая И.С. 
КОНСТРУИРОВАНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ РАРАБОТКИ 
ПОЛИКОМПОНЕНТНОГО СОРБИРОВАННОГО ПРОБИОТИКА 
(Казахский национальный университет им. аль-Фараби) 
 
Определена  биологическая  и  технологическая  совместимость  штаммов  лактобацилл.  Составлена 
композиция  из 3-х  штаммов  лактобацилл Lactobacillus fermentum AK-2R, Lactobacillus acidophilus AA-1, 
Lactobacillus plantarum AP-1. В  композицию  вошли  штаммы,  различающиеся  по  антагонистической 
активности, что расширяет спектр пробиотического действия консорциума. 
 
В последние годы интенсивно развивается биотехнология пробиотиков – препаратов, используемых для 
коррекции  и  профилактики  микроэкологических  нарушений  в  желудочно-кишечном  тракте  человека    и 
животных [1]. Поскольку, в кишечнике человека доминируют бифидобактерии и лактобациллы, большинство 
пробиотиков создается на основе этих бактерий [2]. Эффективность пробиотических препаратов определяется 
совокупностью биологических свойств штаммов, входящих в состав препарата [3]. Производственные бактерии 
должны  обладать  набором  характеристик,  позволяющих  им  конкурировать  с  патогенными  и  условно 
патогенными микроорганизмами. К ним относятся: апатогенность, антагонистическая активность, способность 
к  адгезии  и  колонизации  слизистой  кишечника,  активность  кислотообразования,  определенный  уровень 
резистентности к соляной кислоте и желчи [4]. 
Повышение  эффективности  и  расширение  спектра  биологической  активности  лактосодержащих 
пробиотиков  может  быть  достигнуто  за  счет  разработки  комплексных  препаратов  на  основе  специально 
подобранных бактериальных композиций, включающих совместимые и взаимодополняющие штаммы [5].  
Цель работы: сконструировать бактериальную композицию с учетом совместимости входящих в нее 
штаммов. 
Материалы и методы  
Для  составления  бактериальных  композиций  использовали 10 штаммов  лактобацилл,  выделенных  из 
кишечника 20 детей и взрослых обоего пола, не имеющих в анамнезе инфекционных заболеваний желудочно-
кишечного тракта.  
Антагонистическую  активность  исследовали  методом  отсроченного  антагонизма  в  отношении 
стандартного набора тест-культур [6], а также гомоантагонизма – при совместном культивировании  штаммов 
лактобацилл на плотной питательной среде [7]. Адгезивную активность определяли по способности штаммов 
агглютинировать  агглютинировать  эритроциты  барана,  морских  свинок,  человека IV(AB) и I(0) [8]. Для 
определения лектиноподобных структур использовали реакцию агглютинации с конкавалином А [9].  
Результаты и их обсуждение 
Ключевым критерием при первичном отборе пробиотических штаммов лактобацилл является уровень и 
спектр  их  антагонистической  активности,  который  традиционно  определяется  методами  штрихового  посева, 
диффузионным,  или  отсроченного  антагонизма.  При  этом  не  учитывается  природа  продуцируемых 
отбираемыми  штаммами  веществ,  обладающим  антагонистическим  действием  по  отношению  к  организмам-
мишеням.  У  различных  видов  молочнокислых  бактерий  описаны  бактериоцины  с  высокой  и  микроцины – с 
низкой молекулярной массой, нарушающие проницаемость бактериальной мембраны,  блокирующие белковый 
синтез,  подавляющие  репликацию  ДНК,  изменяющие  мембранный  потенциал  клетки  или  нарушающие 
процессы деления клетки  [10]. С нашей точки зрения, в качестве критерия отбора штаммов для включения в 
пробиотическую  композицию,  являющуюся  микробиологической  основой  комплексных  препаратов,  следует 
проводить  селекцию  штаммов  лактобацилл,  синтезирующих  микроцины  с  широким  спектром 
антагонистической активности.  
Для  их  определения  можно  использовать  метод  агаровых  слоёв – разновидность  метода  отсроченного 
антагонизма.  Применяя  его  различные  модификации,  достаточно  просто  дифференцировать  продукцию 
бактериоцинов с высокой молекулярной массой и микроцинов с низкой молекулярной массой. В первом случае 
на  поверхность  плотной  среды  наносят  бляшками  лактобациллы,  которые  после  культивирования  убивают 
парами  хлороформа,  затем  наслаивают  тест-культуру.  Появление  вокруг  бляшки  зоны  отсутствия  роста - 
положительный  результат.  Для  индикации  микроцинов  на  поверхность  плотной  среды  с  нанесенными, 
высохшими и обработанными в парах хлороформа бляшками, накладывают стерильный целлофан, а сверху на 
него наслаивают полужидкий агар с тест-культурой. Вокруг колоний, продуцирующих микроцины, появляются 
зоны роста индикаторных штаммов [11]. 
Микроцинпродуцирующая активность выявлена у 10 штаммов (таблица 1). 
В  антимикробном  действии  исследуемых  штаммов  имеется  определенная  специфичность,  спектры 
антагонистической активности у разных штаммов далеко не всегда перекрываются. Так, штаммы АА-1 R, AI-

11 
 
17, LK-7 и AС-31 R больше ингибируют грамположительные бактерии, но не дрожжи. Штаммы AK-2R, АК-9, 
АА-9  и АП-4R максимально эффективны против грамотрицательных энтеробактерий.  
 
 
Таблица 1 – Спектр антагонистического действия лактобацилл – продуценов микроцинов 
 
 
 
Штаммы 
Зоны задержки роста тест-микробов, мм (М±m) 
Антагонистическая 
активность в отношении 
грамположительных 
аэробных бактерий 
Антагонистическая активность 
лактобацилл в отношении 
грамотрицательных 
энтеробактерий 
Антагонистическая 
активность в отношении 
штаммовCandida albicans 
АА-1R 22±0,70 
12±0,36 
3±0,11 
АI-17 12±0,14 
18±0,38 
5,5±0,21 
АA-9 7±0,27 
21±0,69 
4,5±0,14 
АР-1R 5,5±0,16 
11±0,35 
10,5±0,16 
АП-4R 2±0,41 
19±0,50 
7,5±0,17 
АC-31R 3,5±0,45 
15±0,45 
4,5±0,18 
АС-1 17±0,34 
8±0,35 
2,5±0,09 
AK-2R 13±0,35 
22±0,56 
7±0,55 
АК-9 18±0,32 
20±0,26 
3±0,07 
LK-7 19±0,18 
6±0,27 
3±0,19 
 
Штаммы АР-1, АП-4R, AK-2R и AI-17 оказывают негативное действие на дрожжевые грибки. Для того, чтобы 
совместить  разные  виды  антагонистической  активности,  следовало  составить  композицию  из  нескольких 
штаммов.  
Для  первичного  скрининга  пробиотических  бактерий,  большое  значение  имеет  способность  к  адгезии, 
ведь  именно  это  качество  определяет  возможность  их  приживления  в  организме  хозяина.  Наиболее 
универсальной моделью для изучения адгезии микроорганизмов являются эритроциты, поскольку гликофорин 
их  поверхностного  слоя  идентичен  гликокаликсу  эпителиальных  клеток,  на  котором  расположены  рецепторы 
для  микробных  адгезинов [8]. Экзогенные  лактобациллы  способны  прикрепляться  к  эпителиоцитам,  создавая 
барьер,  препятствующий  адгезии  и  транслокации  во  внутреннюю  среду  патогенной  и  условно-патогенной 
флоры.  Эта  адгезия  осуществляется    за  счет  наличия  у  лактобацилл  лектиноподобных  структур,  плотно 
связанных  с  клеточной  стенкой [9]. Некоторые  штаммы  способны  синтезировать  слущивающиеся  с 
поверхности клеток адгезиноактивные белки, которые блокируют и дезинтегрируют патогены, защищая таким 
образом макроорганизм от способных к транслокации кишечных бактерий [12]. В связи с этим, полагаем, что 
наилучшую  композицию  препарата  может  дать  комбинация  штаммов-продуцентов  микроцинов,  в  которой 
одновременно  будут  присутствовать  наряду  со  штаммами,  несущими  на  своей  поверхности  слущивающийся 
адгезиноактивный  белок,  еще  и  штаммы,  адгезивную  активность  которых  определяют  лектиноподобные 
структуры, плотно связанные с клеточной стенкой.  
Для  определения  последних  у  исследуемых  штаммов  использовали  реакцию  агглютинации  с 
конкавалином А. Оказалось, что продукция белково-липотейхоевого комплекса присутствует у штамма AK-2R, 
принадлежащих к виду L.fermentum, а также у шаммов АР-1R и АП-4R вида L.plantarum. Выявлено также, что 
набор  адгезинов  у  разных  штаммов  и  видов  лактобацилл,  определяемый  по  способности  культур 
агглютинировать  эритроциты  барана,  морских  свинок,  человека IV(AB) и I(0) P+ вариабилен.  Штамм    LK-7 
вида L.casei имел узкий спектр адгезинов – он умеренно агглютинировал только эритроциты барана. В то же 
время  штаммы  АА-1R  и  AI-17, относящиеся  к  виду  L.аcidophilus  активно  агглютинировали  все  четыре  вида 
эритроцитов.  
Проведенные  исследования  позволяют  заключить,  что  в  состав  комплексного  пробиотического 
препарата можно включать культуры с выраженной экспрессией разных типов адгезинов, но не секретирующие 
лектинзависимый  белок,  и  другой  вариант  лактобацилл,  секретирующий  во  внешюю  среду  этот  субстрат,  но 
при этом проявляющий умеренную адгезивность в тесте с эритроцитами. Исходя из полученных данных, для 
дальнейшего отбора оставлено 5 штаммов. 
Cовмещение штаммов и композицию и их совместное культивирование может приводить к проявлению 
антагонизма не только по отношению к патогенным и условно-патогенным бактериям (гетероантагонизм или 
прямой  антагонизм),  но  и  к  представителям  других  видов  рода  Lactobacillus,  а  иногда  даже  к  отдельным 
штаммам в пределах одного вида. Такой вид активности в литературе принято называть гомоантагонизмом или 
изоантагонизмом [7]. Поэтому  при  конструировании  комплексных  пробиотических  препаратов,  следует 
учитывать биосовместимость штаммов, входящих в бактериальный консорциум.  
Оценку  биосовместимости  штаммов  лактобацилл  проводили  путем  одновременного  совместного 
культивирования  на  плотной  питательной  среде,  а  также  с  использованием  одного  из  вариантов  метода 
отсроченного антагонизма. Результаты этих тестов суммированы в таблице 2. 

12 
 
По  результатам  экспресс-теста  на  биосовместимость  выяснилось,  что  штамм  L.acidophilus  АI-17 
несовместим  со  штаммами  L.fermentum  АК-2R,  L. plantarum  АР-1R  и  даже  со  штаммом  того  же  вида   L. 
acidophilus  АА-1R.  Судя  по  полученным  в  этом  тесте  результатам,  АI-17  проявляет  гомоантагонистическое 
действие в отношении всех используемых в эксперименте штаммов, кроме штамма LK-7. 
Таблица  2 – Биосовместимость  штаммов  лактобацилл  при  совместном  культивировании  на  плотной 
питательной среде 
 
Штамм
ы 
АА-
1R 
АI-
17
 
АР-1R 
АК-
2R 
LK-7 
АА-1R 
 
__
 



АI-17 
__
 
 
__
 
__
 

АР-1R 

__
 
 


АК-2R 

__
 

 

LK-7 




 
 
Поэтому  для  основы  бактериальной  композиции  из  двух  представителей  вида  L. acidophilus    был 
оставлен только штамм АА-1R. Из полученных в этом эксперименте данных видно, что все использованные в 
работе штаммы полностью совместимы друг с другом. Зона задержки роста или полностью отсутствует, или ее 
размер  не  превышает 2-3 мм.  Исходя  из  этого,  теоретически  возможно  составление  4

  разновидностей 
бактериальных композиций:  
№1 - АА-1R+ АР-1R+LK7+АК-2R;  
№2 - АА-1R + АР-1R+АК-2R;  
№3 - АА-12+ АР-1R+ LK7; 
№4 - АА-12+ АК-2R+ LK7.  
В  микробиоценозе  кишечника  человека  присутствуют  представители  трех  таксономических  групп 
лактобацилл:  термобактерии  или  облигатные  гомоферментативные  лактобациллы  (ОГОЛ),  к  которым 
относится  вид  L. acidophilus;  стрептобактерии  или  факультативные  гетероферментативные  лактобациллы 
(ФГЕЛ),  в  эту  группу  входит  вид  L. plantarum  и  бетабактерии - облигатные  гетероферментативные 
лактобациллы  (ОГЕЛ).  Лактобациллы    L. fermentum  и  L.casei - среди  составляющих  эту  группу  видов. 
Комплексный  препарат  должен  включать  представителей  всех  физиологических  групп.  Примером  является 
Казахстанский  пробиотик  «Плантафермин».  Такой  микроэкологический  подход  позволяет  повысить 
эффективность пробиотикотерапии при дисбактериозах. Среди отобранных штаммов к группе ОГОЛ относится 
L.acidophilus  АА-1R,  Этот  вид,  как  указывалось  выше,  составляет  основу  многих  фармабиотиков.  К  группе 
ФГЕЛ  относится  штамм  L.plantarum  АР-1R,  этот  вид  входит  в  состав  широко  известного  препарата 
«Лактобактерин».  Виды  лактобацилл,  такие  как  L.fermentum  и  L.casei,  входящие  в  группу  ОГЕЛ,  в  составе 
пробиотических препаратов используются значительно реже, хотя по своим метаболическим особенностям они 
имеют  сходный  путь  метаболизма  с  бифидобактериями.  Последнее  выглядит  достаточно  привлекательно  с 
точки  зрения  возможности  замены  бифидобактерий  в  комплексных  препаратах  на  виды,  входящие  в  группу 
ОГЕЛ, что может упростить производственный процесс, поскольку лактобациллы можно выращивать на одной 
питательной  среде.  Вместе  с  тем,  используемые  в  работе  штаммы,  принадлежащие  к  группе  ОГЕЛ – LK-7 и 
АК-2R  обладают  схожими  антагонистическими  особенностями,  поэтому  представляется  обоснованным 
включение в композицию лишь одного из этих двух штаммов.  
Таким образом, для разработки препарата предлагаются два варианта бактериального консорциума: №2 - 
АА-1R+АР-1R+АК-2R  и  №3 – АА-1R+АР-1R+LK7.  Из  этих  двух  композиций  одну  наиболее  перспективную, 
используя при этом такую технологическию характеристику, как накопление биомассы.  
Уровень 
накопления 
биомассы 
является 
определяющим 
технологическим 
параметром, 
характеризующим  культуру  лактобактерий  и  влияющим  на  количество  жизнеспособных  клеток  в  дозе 
препарата. Для культивирования использовали казеиново-дрожжевую среду (КДС) традиционно применяемую 
в  производстве  лактосодержащих  пробиотиков . Высокие  ростовые  качества  казеиново-дрожжевой  среды 
объясняются рациональным подбором питательных веществ. 
Глубинное  культивирование  лактобактерий  проводили  при  температуре (37±1)°С  в  условиях 
постоянного  перемешивания,  продолжительность  культивирования  составляла 10-12 ч.  Доза  вносимого 
инокулята  составляла 10% от  объема  питательной  среды.  В  процессе  культивирования  с  помощью 10% 
раствора аммиака поддерживали рН среды на уровне 5,5-6,0. В качестве углеводной добавки использовали 40% 
раствор глюкозы.  
Оптическую  плотность  бактериальных  культур  в  процессе  роста  определяли  с  помощью 
фотоэлектроколориметра (кювета-1 мм, длина волны – 540 нм), пробу бактериальной взвеси перед измерением 
разводили 0,9 % раствором натрия хлорида в соотношении 1:1. 

13 
 
Оказалось,  что  накопление  биомассы  у  штамма LK-7 значительно  ниже,  чем  у  остальных  штаммов.  В 
связи с этим для комплексного препарата была выбрана бактериальная композиция состоящая из штаммов AА-
1R + AР-1R + АК-2R. 
При  исследовании  характера  взаимоотношений  между  отдельными  видами  лактобацилл,  входящих  в 
состав  комбинации  для  нового  пробиотика,  было  установлено  существование  симбиоза  между  ними, 
выражавшееся в усилении антагонистической активности. Антагонистические свойства штаммов, входящих в 
комбинированный  препарат  исследовали  с  применением  прямого  совместного  культивирования  на  плотной 
питательной среде (таблица 3). 
 

1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   21


©emirb.org 2017
әкімшілігінің қараңыз

войти | регистрация
    Басты бет


загрузить материал